|
| 產(chǎn)地 | 國產(chǎn) |
| 品牌 | 上海滬崢 |
| 貨號 | HZZ028-3 |
| 用途 | 僅限科研 |
| 包裝規(guī)格 | 100T |
| 純度 | 詳詢客服% |
| CAS編號 | |
| 是否進(jìn)口 |
Cell Counting Kit-8（簡稱CCK-8），是一種基于WST-8而廣泛應(yīng)用于細(xì)胞增殖和細(xì)胞毒性的快速、高靈敏度檢測的試劑盒。
CCK-8試劑中含有WST-8（化學(xué)名：2-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2,4-二磺酸苯)-2H-四唑單鈉鹽）是一種類似于MTT的化合物，它在電子耦合試劑1-甲氧基-5-甲基吩嗪鎓硫酸二甲酯（1-Methoxy PMS）存在條件下，可以被線粒體內(nèi)的脫氫酶還原為具有高度水溶性的橙黃色甲瓚產(chǎn)物Formazan （參考圖1），生成的Formazan數(shù)量與活細(xì)胞的數(shù)量成正比。因此可利用這一特性直接進(jìn)行細(xì)胞增殖和毒性分析，細(xì)胞增殖越多越快，則顏色越深；細(xì)胞毒性越大，則顏色越淺。
保存條件：4℃避光保存，一年有效。-20℃可以儲藏兩年，但反復(fù)凍融會增加背景值，干擾實(shí)驗(yàn)測定，因此請將經(jīng)常使用的試劑保存在4 ℃。
操作事項(xiàng)：請參閱說明書
產(chǎn)品優(yōu)勢
靈敏度高，線性范圍寬，數(shù)據(jù)可靠，重現(xiàn)性好
操作簡便，省時省力
水溶性，不需要換液，尤其適合于懸浮細(xì)胞
無需放射性同位素和有機(jī)溶劑，對細(xì)胞毒性低
為1瓶溶液，毋需預(yù)制，即開即用
適合于高通量藥物篩選
檢測效果與國外品牌相媲美
注意事項(xiàng)
建議先做幾個孔摸索接種細(xì)胞的數(shù)量和加入CCK-8試劑后的培養(yǎng)時間。
CCK-8 反應(yīng)時間的確定：一般情況下，白細(xì)胞顯色比較困難，因此需要增加細(xì)胞數(shù)量和延長 CCK-8 反應(yīng)時間。懸浮細(xì)胞與貼壁細(xì)胞相比較難顯色，因此懸浮細(xì)胞在加入 CCK-8 培養(yǎng)0.5-4小時后，可先從培養(yǎng)箱取出，目測或用酶標(biāo)儀測定顯色程度，若顯色困難可以繼續(xù)培養(yǎng)數(shù)小時后再確定。對于貼壁細(xì)胞，CCK-8 的培養(yǎng)時間一般為 0.5-4 小時，在培養(yǎng) 20 分鐘左右即可取出肉眼觀察顯色程度。
每孔接種細(xì)胞數(shù)：當(dāng)使用標(biāo)準(zhǔn)96孔板時，貼壁細(xì)胞的最小接種量至少為1000個/孔 (100 μl培養(yǎng)基)。檢測白細(xì)胞時的靈敏度相對較低，因此推薦接種量不低于2500個/孔 (100 μl培養(yǎng)基)。如果要使用24孔板或6孔板實(shí)驗(yàn)，請先計算每孔相應(yīng)的接種量，并按照每孔培養(yǎng)基總體積的10%加入CCK-8溶液。
設(shè)定空白對照：在不含細(xì)胞的培養(yǎng)基中加入CCK-8，培養(yǎng)一定的時間，測定450 nm的吸光度即為空白對照。在做加藥實(shí)驗(yàn)（細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)）時，還應(yīng)考慮藥物的吸收，可在加入藥物的培養(yǎng)基中加入CCK-8，培養(yǎng)一定的時間，測定450 nm的吸光度作為空白對照。
影響CCK-8測定的物質(zhì)：由于CCK-8檢測細(xì)胞活性的原理是通過檢測活細(xì)胞脫氫酶催化的反應(yīng)，所以如果待測體系中存在氧化還原物質(zhì)則可能會干擾檢測結(jié)果，還原性物質(zhì)會使吸光度增加，氧化性物質(zhì)會使吸光度減小，因此應(yīng)需設(shè)法去除這些物質(zhì)的影響。酚紅和血清對本試劑盒的測定無明顯影響，培養(yǎng)基中酚紅的吸光度可以在計算時，通過扣除只含有培養(yǎng)基的對照孔中本底吸光度而消除，因此不會對檢測結(jié)果造成影響。
測定波長：如果樣品為高渾濁度的細(xì)胞懸液，建議采用雙波長進(jìn)行測定，檢測波長450nm，參比波長600-650nm。如果沒有450nm的濾光片，可以使用吸光度在430-490nm之間的濾光片，但是450nm檢測靈敏度*。
當(dāng)在培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)時，培養(yǎng)板最外一圈的孔最容易干燥揮發(fā)，由于體積不準(zhǔn)確而增加誤差。一般情況下，最外一圈的孔只加培養(yǎng)基，不作為測定孔用。
如果細(xì)胞培養(yǎng)時間較長，培養(yǎng)基顏色發(fā)生變化，應(yīng)洗滌細(xì)胞更換培養(yǎng)基后再加CCK-8檢測。
為了您的安全和健康，操作時請穿著實(shí)驗(yàn)服并佩戴一次性手套。
|
|
|
|
|
